Untuk menentukan banyaknya konsentrasi total ammonia nitrogen dalam air contoh digunakan prinsip spektrofotomerik yang dilakukan di labortorium. Agar dapat terbaca oleh mesin spektrofotometer, amonia dalam 10 ml air contoh yang telah disaring harus direaksikan terlebih dahulu dengan 0.5 ml senyawa fenol dan 0.5 ml sodium nitroprusid kemudian dihomogenkan, lalu di reaksikan kembali dengan oxidizing reagent sebanyak 1 ml dan dihomogenkan kembali.
Setelah itu, tabung reaksi yang digunakan untuk melakukan reaksi tersebut ditutup rapat dan didiamkan selama satu jam. Lalu absorbansi warna air contoh (biru) diukur dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 640 nm. Warna biru yang ditimbulkan merupakan akibat terbentuknya senyawa indofenol. Kemudian absorbansi air contoh disesuaikan dengan absorbansi akuades (blanko) dan konstanta perhitungan (Stirling et al., 1985dalam Subandiyo, 1992).
Cara Kerja :
(1) Saring 25 – 50 ml air sampel dengan kertas saring whatman no 42 (jangan menggunakan vacuum pump, agar tak ada ammonia yang hilang.
(2) Pipet 10 ml air sampel yang telah disaring, masukkan ke dalam gelas piala
(3) Sambil diaduk dengan magnetic stirrer tambahkan 1 tetes mnso4, 0,5 ml chlorox, dan 0,6 ml phenate. Diamkan selama ±15 menit, sampai pembentukan warna stabil (warna akan tetap stabil selama beberapa jam)
(4) Buat larutan blanko dari 10 ml akuades, lakukan prosedur 3
(5) Buat larutan standart dari 10 ml larutan standart ammonia (0,3 ppm) lakukan prosedur 3
(6) Dengan larutan blanko pada panjang gelombang 630 nm, set spektofotometer pada absorbance 0,00 (transmitteance 100%) kemudian lakukan pengukuran sampel dan larutan standart
(7) Catat data yang diperoleh
Keterangan:
Cst : konsentrasi larutan standart (0,03 mg/l)
Ast : nilai absorbance (transmittance) larutan standart
As : nilai absorbance (transmittance) air sampel
Konsentrasi faktor yang terukur tersebut dinyatakan dalam kadar nitrogen (N) yang terdapat dalam ammonia (NH3). Untuk mengetahui konsentrasi ammonia yang dinyatakan dalam mg NH3/L, nilai TAN di atas dikalikan dengan actor seperti pada persamaan berikut:
Keterangan :
BM : berat molekul
BA : berat atom